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淺談目前新冠病毒的檢測方法

發(fā)布時間：2020-09-04 瀏覽次數(shù)： 加載中...

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當前批準上市的新冠肺炎檢測試劑主要包括兩類，一類是核酸檢測試劑，一類是抗體檢測試劑。隨著對疾病的認識和研發(fā)工作的進展，將來還會有更多的檢測試劑和方法投入使用。

第一類的核酸檢測過程包括標本處理、核酸提取、進行PCR檢測等多個步驟，平均檢測時間需要2-3個小時。由于它是直接對我們采集標本中的病毒核酸進行檢測，特異性強，敏感度相對較高，是當前主要的檢測手段。

第二種抗體檢測，包括膠體金法和磁微?；瘜W發(fā)光法。其中膠體金法平均檢測時間15分鐘左右，磁微?；瘜W發(fā)光法一般需要30—60分鐘?？贵w檢測是對人體血液中的抗體水平進行檢測，在疾病的感染早期，人體內(nèi)可能還沒有產(chǎn)生抗體，所以它存在檢測的窗口期。因此，抗體檢測可用于對核酸檢測陰性的病例進行輔助診斷，也可以對病例進行排查篩查，但是還不能代替核酸檢測方法。

接下來就為大家詳細闡述新冠基因核酸測試法，即RT-PCR法。

1、 與常規(guī)PCR反應相比，試劑中要增加熒光試劑，插入DNA片段中，用于定量檢測。

2、 PCR，擴增新冠病毒的目標DNA片段。

3、 Ct值，即PCR擴增循環(huán)數(shù)目，當初始病毒DNA濃度較高時，達到某一熒光強度的循環(huán)數(shù)目越少。

4、 檢測設備和試劑：B2型生物安全柜，RT-PCR儀，超純水機，核酸檢測試劑盒。

參照2020版中國藥典3407 外源性DNA殘留量測定法，實驗用水應使用超純水，否則可能由于實驗用水中含有有機物、酶、離子等造成實驗失敗或污染，如下表所示。

問題	可能原因
無模板對照中有信號存在，且或熔解曲線圖中出現(xiàn)多個峰	模板或試劑被核酸(DNA、 cDNA) 污染。
無模板對照中有信號存在，且或熔解曲線圖中出現(xiàn)多個峰	存在引物二聚體或其它特殊結構。
定量 PCR 圖或凝膠上無明顯的 PCR 產(chǎn)物	模板中含有抑制劑、核酸酶或蛋白酶，或模板已被降解。
PCR 效率超過 110%	模板中含有抑制劑、核酸酶或蛋白酶，或模板已被降解。

分析實驗室用水建議

實驗室	實驗項目	水質(zhì)要求
理化室	儀器分析	一級超純水（終端精制器）
	常規(guī)理化實驗	三級純水
	試劑配制	三級純水
	器具精洗	三級純水
微生物室	培養(yǎng)基配制	三級純水
	分子生物學實驗	一級超純水
	Elisa實驗（配液，洗板）	一級超純水
動物實驗室	清潔級動物飲用水	無菌水（終端精制器）

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制藥企業(yè)實驗室用水要求

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第二種抗體檢測，包括膠體金法和磁微?；瘜W發(fā)光法。其中膠體金法平均檢測時間15分鐘左右，磁微粒化學發(fā)光法一般需要30—60分鐘。抗體檢測是對人體血液中的抗體水平進行檢測，在疾病的感染早期，人體內(nèi)可能還沒有產(chǎn)生抗體，所以它存在檢測的窗口期。因此，抗體檢測可用于對核酸檢測陰性的病例進行輔助診斷，也可以對病例進行排查篩查，但是還不能代替核酸檢測方法。

接下來就為大家詳細闡述新冠基因核酸測試法，即RT-PCR法。

1、 與常規(guī)PCR反應相比，試劑中要增加熒光試劑，插入DNA片段中，用于定量檢測。

2、 PCR，擴增新冠病毒的目標DNA片段。

3、 Ct值，即PCR擴增循環(huán)數(shù)目，當初始病毒DNA濃度較高時，達到某一熒光強度的循環(huán)數(shù)目越少。

4、檢測設備和試劑：B2型生物安全柜，RT-PCR儀，超純水機，核酸檢測試劑盒。

問題	可能原因
無模板對照中有信號存在，且或熔解曲線圖中出現(xiàn)多個峰	模板或試劑被核酸(DNA、 cDNA) 污染。
無模板對照中有信號存在，且或熔解曲線圖中出現(xiàn)多個峰	存在引物二聚體或其它特殊結構。
定量 PCR 圖或凝膠上無明顯的 PCR 產(chǎn)物	模板中含有抑制劑、核酸酶或蛋白酶，或模板已被降解。
PCR 效率超過 110%	模板中含有抑制劑、核酸酶或蛋白酶，或模板已被降解。

分析實驗室用水建議

實驗室	實驗項目	水質(zhì)要求
理化室	儀器分析	一級超純水（終端精制器）
	常規(guī)理化實驗	三級純水
	試劑配制	三級純水
	器具精洗	三級純水
微生物室	培養(yǎng)基配制	三級純水
	分子生物學實驗	一級超純水
	Elisa實驗（配液，洗板）	一級超純水
動物實驗室	清潔級動物飲用水	無菌水（終端精制器）